NobleRyder SDS裂解液
NobleRyder SDS裂解液 NobleRyder SDS裂解液 即用型液體試劑 P4815-100ml
SDS裂解液
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一種極其強(qiáng)烈的細(xì)胞組織快速裂解液并獲得總蛋白質(zhì)。其裂解液強(qiáng)度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA裂解液(中)、通用細(xì)胞裂解液、Western及IP細(xì)胞裂解液，所獲得的蛋白質(zhì)可以用于Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等。
SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等組成，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
NobleRyder SDS裂解液
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | P4815 | Storage |
SDS Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
取SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻，加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。
去除培養(yǎng)液，用PBS、NS或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心，棄上清，留取沉淀。
按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入riton-SDS Lysis Buffer。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)，細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃裂解15～30min。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
進(jìn)行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
取SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后,使用前取適量裂解液加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。
低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。
用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔細(xì)胞加入150μl裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。通常裂解液作用于細(xì)胞1～3s內(nèi)，細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 置于冰上或4℃裂解15～30min。
10000～12000g， 4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
進(jìn)行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(三)組織樣本
取SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后，使用前取適量裂解液加入PMSF，使PMSF終濃度為1mM。
把組織jian切成細(xì)小的碎片，越小越好。
取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃繼續(xù)裂解10～20min。
10000～12000g，4℃離心5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。
進(jìn)行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
注意事項(xiàng)：
去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解中，如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50～100萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解。少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。
如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
溶解SDS Lysis Buffer時(shí)，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間，避免裂解液中的有效成分失效。
細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或4℃進(jìn)行。
有效期： 12個(gè)月有效。
NobleRyder SDS裂解液
